超凈工作臺(tái)在胡蘿卜愈傷組織建立實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

一、 材料和設(shè)備

超凈工作臺(tái)或者無菌接種室

培養(yǎng)基 N6+2 mg/L 2,4-D

帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿，無菌水/解剖刀、槍型鑷子、刀片

無病蟲的胡蘿卜直根數(shù)十個(gè)

消毒劑 0.2%的升汞溶液

70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球

l000毫升的玻璃燒杯數(shù)個(gè)、酒精燈、火柴、記號(hào)筆、小刷子(可用一次性牙刷)

二、實(shí)驗(yàn)材料 新鮮胡蘿卜、胡蘿卜愈傷組織

三、實(shí)驗(yàn)步驟'

1 選擇無傷、無病、形狀較規(guī)則的胡蘿卜，用小刷子在流動(dòng)的自來水下洗刷胡蘿卜，除凈表面所有的泥屑。可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的時(shí)期，選用其它的實(shí)驗(yàn)材料。

2 將胡蘿卜切成大約 40 mm厚的片段,放入100或500 ml的燒杯中，倒入消毒液，將植物材料覆蓋、浸泡10-30 min。在滅菌過程中，在每個(gè)材料上做好標(biāo)記，并對(duì)應(yīng)地放在預(yù)接種的培養(yǎng)基邊上。接種后在培養(yǎng)瓶上標(biāo)明培養(yǎng)物名稱和培養(yǎng)日期。

3 在超凈工作臺(tái)上，倒掉消毒液，用無菌水沖洗3-5次，以便去除殘留的消毒液。

4 取消毒過的胡蘿卜放入已滅菌的帶有濾紙的培養(yǎng)皿中，用無菌解剖刀從兩端各切去10毫米，再將留下的胡蘿卜直根切成一系列一毫米厚的橫切片。取其中的一片轉(zhuǎn)到另一個(gè)已滅菌的帶有吸水紙的培養(yǎng)皿中，再將每一片切成小塊，使其每個(gè)小塊上均包含木質(zhì)部、形成層和韌皮部，外植體的大小要盡量一致。

5 接種 取下培養(yǎng)瓶的塞子(或錫鉑紙)，用火灼燒瓶口2 cm處，手持培養(yǎng)瓶呈45o角，用消毒鑷子把4-8塊外植體轉(zhuǎn)到瓊脂培養(yǎng)基的表面，注意把靠近根尖的一面接觸培養(yǎng)基。然后立即將燒過的封口棉塞或錫鉑紙封住瓶口。每?jī)纱无D(zhuǎn)移之間都要用酒精燈灼燒鑷子，防止帶菌。

6 培養(yǎng) 接種好的外植體在25℃的培養(yǎng)箱中，黑暗條件下培養(yǎng)四周左右就會(huì)形成一塊較大的愈傷組織。